Tajriba printsipi
Gemoglobin elektroforezi turli xil normal va anormal gemoglobinlarni aniqlash va tasdiqlashga qaratilgan.
Har xil gemoglobin turlarining zaryadlari va izoelektrik nuqtalari har xil bo'lganligi sababli, ma'lum bir pH bufer eritmasida, gemoglobinning izoelektrik nuqtasi bufer eritmasining pH darajasidan past bo'lsa, gemoglobin manfiy zaryad olib, elektroforez paytida anod tomon ko'chib o'tadi. Aksincha, musbat zaryadli gemoglobin katod tomon harakat qiladi.
Muayyan kuchlanish ostida va ma'lum bir elektroforez vaqtidan so'ng, har xil zaryad va molekulyar og'irlikdagi gemoglobinlar turli xil migratsiya yo'nalishlari va tezligini namoyish etadi. Bu alohida zonalarni ajratish imkonini beradi va keyinchalik turli gemoglobinlarni aniqlash uchun ushbu zonalarda kolorimetrik yoki elektroforetik skanerlash tahlilini o'tkazish mumkin. Eng ko'p ishlatiladigan usul pH 8,6 tsellyuloza asetat membrana elektroforezidir.
Sitoplazma ichida glikogen yoki polisakkarid moddalarda (masalan, mukopolisaxaridlar, mukoproteinlar, glikoproteinlar, glikolipidlar va boshqalar) mavjud bo'lgan etilen glikol guruhlari (CHOH-CHOH) davriy kislota bilan oksidlanadi va aldegid guruhlariga (CHO-CHO) aylanadi. Ushbu aldegid guruhlari rangsiz binafsha-qizil Schiff reaktivi bilan birlashib, binafsha-qizil bo'yoq hosil qiladi va hujayradagi polisaxaridlar mavjud bo'lgan joylarda cho'kadi. Bu reaktsiya davriy kislota-Schiff (PAS) bo'yalishi deb nomlanadi, ilgari glikogenli bo'yash deb ataladi.
Tajriba usuli
Materiallar:Tsellyuloza asetatmembrane, elektroforez apparati(DYCP-38C va quvvat manbai DYY-6C), Yuqori namuna yuklash vositasi (pipetka), spektrofotometr, kolorimetrik kyuvetalar, buferlar.
Bufer:
(1) pH 8,6 TEB buferi: 10,29 g Tris, 0,6 g EDTA, 3,2 g borik kislotasini torting va 1000 ml gacha distillangan suv qo'shing.
(2) Boratli tampon: 6,87 g boraks va 5,56 g borik kislotasini torting va 1000 ml gacha distillangan suv qo'shing.
Jarayon:
PGemoglobin eritmasini tiklash
Antikoagulyant sifatida geparin yoki natriy sitrat o'z ichiga olgan 3 ml qonni oling. 10 daqiqa davomida 2000 rpm tezlikda santrifüj qiling va plazmani tashlang. Qizil qon hujayralarini fiziologik sho'r suv bilan uch marta yuving (750 rpm, har safar 5 daqiqa santrifüj). 10 daqiqa davomida 2200 aylanish tezligida santrifüj qiling va supernatantni tashlang. Teng miqdorda distillangan suv qo'shing, so'ngra uglerod tetrakloridning 0,5 barobar hajmini qo'shing. 5 daqiqa davomida kuchli silkiting va keyin foydalanish uchun yuqori Hb eritmasini to'plash uchun 2200 rpm tezlikda 10 daqiqa davomida santrifüj qiling.
Membranani namlash
Tsellyuloza asetat membranasini 3 sm × 8 sm o'lchamdagi chiziqlar bilan kesib oling. Ularni pH 8,6 TEB buferida toʻliq toʻyingangacha namlang, soʻng olib tashlang va filtr qogʻozi bilan quriting.
Aniqlanish
Pipetka yordamida 10 mkl gemoglobin eritmasini vertikal ravishda tsellyuloza asetat membranasiga (qo'pol tomoni), chetidan taxminan 1,5 sm masofada aniqlang.
Elektroforez
Borat bufer eritmasini elektroforez kamerasiga quying. Tsellyuloza asetat membranasini dog'li tomoni bilan kameraning katod uchiga joylashtiring. 200 V kuchlanishda 30 daqiqa davomida ishlang.
Elutsiya
HbA va HbA2 zonalarini kesib, ularni alohida probirkalarga solib, 15 ml va 3 ml distillangan suv qo'shing. Gemoglobinni to'liq elutsiya qilish uchun sekin silkiting, keyin aralashtiring.
Kolorimetriya
Elutsiya eritmasi uchun distillangan suv yordamida absorbansni nolga tenglashtiring va absorbansni 415 nm da o'lchang.
Hisoblash
HbA2(%) = HbA2 trubasining yutilishi / (HbA trubasining yutilishi × 5 + HbA2 naychasining yutilishi) × 100%
Tajriba natijalarini hisoblash
pH 8,6 TEB bufer tsellyuloza asetat elektroforez uchun mos yozuvlar diapazoni: HbA > 95%, HbA2 1%-3,1%
Eslatmalar
Elektroforez vaqti juda uzoq bo'lmasligi kerak. Elektroforez paytida tsellyuloza asetat membranasi qurib ketmasligi kerak. HbA va HbA2 aniq ajratilganda elektroforezni to'xtating. Uzoq muddatli elektroforez tarmoqli diffuziya va loyqalikka olib kelishi mumkin.
Juda ko'p namuna ishlatishdan saqlaning. Haddan tashqari gemoglobin suyuqligi tarmoqli ajralishiga yoki etarli darajada bo'yalmasligiga olib kelishi mumkin, natijada HbA darajasi noto'g'ri ko'tariladi.
Tsellyuloza asetat membranasining oqsillar bilan ifloslanishini oldini olish.
Oqim juda yuqori bo'lmasligi kerak; aks holda, gemoglobin bantlari ajralmasligi mumkin.
Har doim oddiy odamlardan olingan namunalarni va zarur bo'lgan anormal gemoglobinlarni nazorat sifatida kiriting.
Beijing Liuyi Biotechnology kompaniyasi model bo'lgan gemoglobin elektroforezi uchun professional elektroforez tankini ishlab chiqaradi.DYCP-38Ctsellyuloza asetat membrani elektroforez tanki va tsellyuloza asetat membranasi elektroforez tanki uchun elektroforez quvvat manbaining ikkita modeli mavjud.YYY-2CvaYYY-6Cquvvatlantirish manbai.
Ayni paytda, Pekin Liuyi Biotexnologiyasi mijozlar uchun tsellyuloza asetat membranasini taqdim etadi va tsellyuloza asetat membranasining o'lchamini sozlash mumkin. Bizdan namunalar va qo'shimcha ma'lumot so'rashga xush kelibsiz.
Pekin Liuyi brendi Xitoyda 50 yildan ortiq tarixga ega va kompaniya butun dunyo bo'ylab barqaror va yuqori sifatli mahsulotlarni taqdim eta oladi. Ko'p yillik rivojlanish orqali u sizning tanlovingizga loyiqdir!
Endi biz hamkorlarni qidirmoqdamiz, ham OEM elektroforez tanki, ham distribyutorlar mamnuniyat bilan qabul qilinadi.
Mahsulotlarimizni xarid qilish rejangiz bo'lsa, iltimos biz bilan bog'lanishdan tortinmang. Bizga elektron pochta orqali xabar yuborishingiz mumkin[elektron pochta himoyalangan]yoki[elektron pochta himoyalangan], yoki bizga +86 15810650221 raqamiga qo'ng'iroq qiling yoki Whatsapp +86 15810650221 yoki Wechat qo'shing: 15810650221
Yuborilgan vaqt: 20-sentabr-2023