Poliakrilamid jel elektroforez
Jel elektroforezi biologik fanlar bo'yicha laboratoriyalarda DNK, RNK va oqsillar kabi makromolekulalarni ajratish imkonini beruvchi asosiy usuldir. Turli xil ajratish vositalari va mexanizmlari ushbu molekulalarning kichik qismlarini ularning jismoniy xususiyatlaridan foydalangan holda samaraliroq ajratish imkonini beradi. Ayniqsa, oqsillar uchun poliakrilamid gel elektroforezi (PAGE) ko'pincha tanlov usuli hisoblanadi.
PAGE - oqsillar kabi makromolekulalarni ularning elektroforetik harakatchanligi, ya'ni tahlil qiluvchi moddalarning qarama-qarshi zaryadli elektrodga qarab harakat qilish qobiliyatiga qarab ajratadigan usul. PAGEda bu molekulaning zaryadi, hajmi (molekulyar og'irligi) va shakli bilan belgilanadi. Analitlar poliakrilamid jelida hosil bo'lgan teshiklardan o'tadi. DNK va RNKdan farqli o'laroq, oqsillar tarkibidagi aminokislotalarga qarab o'zgaradi, bu ularning ishlashiga ta'sir qilishi mumkin. Aminokislota satrlari, shuningdek, ularning ko'rinadigan hajmiga ta'sir qiluvchi ikkilamchi tuzilmalarni hosil qilishi mumkin va natijada ular teshiklardan qanday o'tishlari mumkin. Shuning uchun, agar o'lchamini aniqroq baholash kerak bo'lsa, ularni chiziqli qilish uchun elektroforezdan oldin oqsillarni denatüratsiya qilish maqsadga muvofiqdir.
SDS SAHIFA
Natriy-dodesil sulfat poliakrilamid gel elektroforezi 5 dan 250 kDa gacha bo'lgan oqsil molekulalarini ajratish uchun ishlatiladigan usuldir. Proteinlar faqat molekulyar og'irligiga qarab ajratiladi. Anion sirt faol moddasi bo'lgan natriy dodesil sulfat jellarni tayyorlashda qo'shiladi, ular oqsil namunalarining ichki zaryadlarini maskalaydi va ularga xuddi shunday zaryadning massa nisbatini beradi. Oddiy qilib aytganda, u oqsillarni denatüratsiya qiladi va ularga salbiy zaryad beradi.
Native PAGE
Native PAGE - bu oqsillarni ajratish uchun denatüratsiyalanmagan jellardan foydalanadigan usul. SDS PAGE dan farqli o'laroq, jellarni tayyorlashda denaturatsiya qiluvchi vosita qo'shilmaydi. Natijada oqsillarning ajralishi oqsillarning zaryadi va hajmiga qarab sodir bo'ladi. Ushbu texnikada oqsillarning konformatsiyasi, katlamasi va aminokislotalar zanjiri ajratishga bog'liq bo'lgan omillardir. Proteinlar bu jarayonda zarar ko'rmaydi va ajralish tugagandan so'ng tiklanishi mumkin.
Poliakrilamid gel elektroforezi (PAGE) qanday ishlaydi?
PAGE ning asosiy printsipi analitlarni elektr toki yordamida poliakrilamid gelning teshiklaridan o'tkazish orqali ajratishdir. Bunga erishish uchun akrilamid-bisakrilamid aralashmasi ammoniy persulfat (APS) qo'shilishi bilan polimerlanadi (poliakrilamid). Tetrametiletilendiamin (TEMED) tomonidan katalizlanadigan reaktsiya analitlar harakatlanishi mumkin bo'lgan teshiklari bo'lgan to'rga o'xshash tuzilma hosil qiladi (2-rasm). Jel tarkibiga kiritilgan umumiy akrilamidning ulushi qanchalik yuqori bo'lsa, teshik hajmi shunchalik kichik bo'ladi, shuning uchun ular orqali o'ta oladigan oqsillar kichikroq bo'ladi. Akrilamidning bisakrilamidga nisbati ham gözenek hajmiga ta'sir qiladi, lekin bu ko'pincha doimiy saqlanadi. Kichikroq gözenek o'lchamlari, shuningdek, kichik oqsillarning jel bo'ylab harakatlanish tezligini pasaytiradi, ularning o'lchamlarini yaxshilaydi va oqim qo'llanilganda tezda buferga tushishining oldini oladi.
Poliakrilamid gel elektroforez uchun uskunalar
Jel elektroforez xujayrasi (tank / kamera)
Poliakrilamid gel elektroforezi (PAGE) uchun jel idishi agaroz jel idishidan farq qiladi. Agaroz jel idishi gorizontal, PAGE tanki esa vertikal. Vertikal elektroforez xujayrasi (tank/kamera) orqali ikkita shisha plastinka orasiga yupqa gel (odatda 1,0 mm yoki 1,5 mm) quyiladi va jelning pastki qismi bir kamerada buferga, yuqori qismi esa buferga botirilishi uchun o'rnatiladi. boshqa xonada. Oqim qo'llanilganda, oz miqdorda bufer jel orqali yuqori kameradan pastki kameraga o'tadi. Jihoz tik holatidadir bo'lishini ta'minlaydigan kuchli qisqichlar yordamida jelning tez ishlashini ta'minlaydi, bu esa bir tekis sovutish bilan ajralib turadi.
Beijing Liuyi Biotechnology Co., Ltd (Liuyi Biotechnology) bir qator o'lchamdagi poliakrilamid jel elektroforez hujayralarini (tanklar / kameralar) ishlab chiqaradi. DYCZ-20C va DYCZ-20G modellari DNK ketma-ketligini tahlil qilish uchun vertikal elektroforez hujayralari (tanklar/kameralar). Ba'zi vertikal elektroforez hujayralari (tanklar/kameralar) DYCZ-24DN, DYCZ-25D va DYCZ-25E modellari kabi blot tizimiga mos keladi, DYCZ-40D, DYCZ-40G va DYCZ-40F Western Blotting tizimi modeliga mos keladi. oqsil molekulasini jeldan membranaga o'tkazish uchun ishlatiladi. SDS-PAGE elektroforezidan so'ng, Western Blotting - oqsil aralashmasidagi ma'lum bir oqsilni aniqlash usuli. Siz eksperimental talablarga ko'ra ushbu blot tizimlarini tanlashingiz mumkin.
Elektroforez quvvat manbai
Jelni ishlatish uchun elektr energiyasini ta'minlash uchun sizga elektroforez quvvat manbai kerak bo'ladi. Liuyi Biotechnology da biz barcha ilovalar uchun elektroforez quvvat manbalarini taqdim etamiz. Yuqori barqaror kuchlanish va oqimga ega bo'lgan DYY-12 va DYY-12C modeli yuqori kuchlanish talabiga javob berishi mumkin elektroforez . U stend, vaqt, VH va bosqichma-bosqich qo'llash funktsiyasiga ega. Ular IEF va DNK sekvensiyasi elektroforezini qo'llash uchun idealdir. Umumiy protein va DNK elektroforezini qo'llash uchun bizda DYY-2C, DYY-6C, DYY-10 va boshqalar mavjud bo'lib, ular elektroforez hujayralari (tanklar / kameralar) bilan issiq sotiladigan quvvat manbalaridir. Ular o'rta va past kuchlanishli elektroforez ilovalari uchun ishlatilishi mumkin, masalan, maktab laboratoriyasi, shifoxona laboratoriyasi va boshqalar. Elektr ta'minoti uchun boshqa modellar, iltimos, bizning veb-saytimizga tashrif buyuring.
Liuyi brendi Xitoyda 50 yildan ortiq tarixga ega va kompaniya butun dunyo bo'ylab barqaror va yuqori sifatli mahsulotlarni taqdim eta oladi. Yillik rivojlanish orqali u sizning tanlovingizga loyiqdir!
Biz haqimizda qo'shimcha ma'lumot olish uchun elektron pochta orqali biz bilan bog'laning[elektron pochta himoyalangan] or [elektron pochta himoyalangan].
Poliakrilamid gel elektroforezi nima uchun havolalar?
1. Karen Styuard PhD Poliakrilamid gel elektroforezi, u qanday ishlaydi, texnika variantlari va uning qo'llanilishi
Yuborilgan vaqt: 2022 yil 23-may